產(chǎn)品分類
PRODUCTS CATEGORY
推薦產(chǎn)品
RECOMMENDED PRODUCTS
聯(lián)系我們
CONTACT US
電話：15611258074
Q Q： 43834183
郵箱：43834183@qq.com
地址：北京市大興區(qū)黃村安順南路
Q Q： 43834183
郵箱：43834183@qq.com
地址：北京市大興區(qū)黃村安順南路
行業(yè)動(dòng)態(tài)
INDUSTRY TRENDS
- 班德液氮罐產(chǎn)品品質(zhì)大升級(jí),高
- 液氮罐初次使用前需要進(jìn)行哪些
- ?生物液氮罐在高溫環(huán)境下使用
- 凍存細(xì)胞的保存時(shí)間有多久才不
- 液氮罐溫度探頭位置標(biāo)準(zhǔn)
- 液氮罐是否會(huì)涉及揮發(fā)性有機(jī)物
- 液氮罐儲(chǔ)存樣品的一些注意要點(diǎn)
- ?170升液氬杜瓦罐尺寸規(guī)格
- 液氮罐蒸發(fā)率測(cè)試方法怎樣比較
- 用液氮罐凍存不同的細(xì)胞會(huì)交叉
- 液氮管道安全閥霜凍過(guò)厚怎么處
- 國(guó)產(chǎn)30升液氮罐多少錢一個(gè)
- 杜瓦罐壓力過(guò)高或過(guò)低是什么原
- 購(gòu)買自增壓液氮罐要不要索取檢
無(wú)細(xì)胞百日咳攻擊菌的制備及液氮保存材料和方法
時(shí)間:2019-05-13 10:29來(lái)源: 作者:班德液氮罐 點(diǎn)擊:
次
1、 材料 自增壓液氮罐
1.1分裝容器
凍存管：4306592.0ml corning incorporated，cor-ning，NY14831 Made in Mexico。
1.2保護(hù)劑及培養(yǎng)基
甘油：分析純。
蛋白胨水、活性炭半綜合培養(yǎng)基和改良包-姜羊血培養(yǎng)基，由長(zhǎng)春生物制品研究所培養(yǎng)基室提供。
1.3菌種
百日咳攻擊菌種株18323由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。
2、方法
2.1攻擊菌的制備
2.1.1 菌種復(fù)蘇及傳代 將菌種在無(wú)菌條件下復(fù)蘇、溶解、混勻、傳到包$姜羊血培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)72h，同時(shí)作純菌試驗(yàn)。合格后傳二代經(jīng)37℃培養(yǎng)48h，用活性炭半綜合培養(yǎng)基傳三代、四代、五代、六代、七代、八代、九代，37℃培養(yǎng)24h。
2.1.2保護(hù)劑的制備 將甘油加入蛋白胨水中制成含10%甘油的蛋白胨水，混勻滅菌。
2.1.3 菌懸液的制備 將各代菌液分別刮入裝有ph7.2緩沖生理氯化鈉溶液的大試管中，制成菌懸液并混勻，同時(shí)作純菌試驗(yàn)，測(cè)定菌液濃度。
2.2攻擊菌的分裝
將菌懸液用含10%甘油的蛋白胨水稀釋至27億/ml，分裝于滅菌的凍存管中，每管1.5～1.8ml。
2.3攻擊菌保存
為防止細(xì)胞急劇冷凍后在細(xì)胞內(nèi)形成冰晶，降低存活率，所以每分鐘下降1℃的慢速凍結(jié)至-30℃。然后迅速放入液氮保藏器內(nèi)的-150℃氣相中，最后浸入到-196℃液氮中。
2.4攻擊菌的檢定
2.4.1攻擊菌復(fù)蘇 將凍存管從液氮罐中取出立即放入38～40℃的水浴中進(jìn)行急劇解凍，直到全部融化為止。
2.4.2攻擊菌稀釋 打開凍存管，將攻擊菌用生理氯化鈉溶液稀釋成每稀釋度含80000、8000、800、80和8個(gè)菌。
2.4.3攻擊途徑及劑量 每稀釋度（0.03ml）腦腔攻擊10只小鼠，每稀釋度分別攻擊80000個(gè)菌、8000個(gè)菌、800個(gè)菌、80個(gè)菌、8個(gè)菌。自增壓液氮罐
1.1分裝容器
凍存管：4306592.0ml corning incorporated，cor-ning，NY14831 Made in Mexico。
1.2保護(hù)劑及培養(yǎng)基
甘油：分析純。
蛋白胨水、活性炭半綜合培養(yǎng)基和改良包-姜羊血培養(yǎng)基，由長(zhǎng)春生物制品研究所培養(yǎng)基室提供。
1.3菌種
百日咳攻擊菌種株18323由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。
2、方法
2.1攻擊菌的制備
2.1.1 菌種復(fù)蘇及傳代 將菌種在無(wú)菌條件下復(fù)蘇、溶解、混勻、傳到包$姜羊血培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)72h，同時(shí)作純菌試驗(yàn)。合格后傳二代經(jīng)37℃培養(yǎng)48h，用活性炭半綜合培養(yǎng)基傳三代、四代、五代、六代、七代、八代、九代，37℃培養(yǎng)24h。
2.1.2保護(hù)劑的制備 將甘油加入蛋白胨水中制成含10%甘油的蛋白胨水，混勻滅菌。
2.1.3 菌懸液的制備 將各代菌液分別刮入裝有ph7.2緩沖生理氯化鈉溶液的大試管中，制成菌懸液并混勻，同時(shí)作純菌試驗(yàn)，測(cè)定菌液濃度。
2.2攻擊菌的分裝
將菌懸液用含10%甘油的蛋白胨水稀釋至27億/ml，分裝于滅菌的凍存管中，每管1.5～1.8ml。
2.3攻擊菌保存
為防止細(xì)胞急劇冷凍后在細(xì)胞內(nèi)形成冰晶，降低存活率，所以每分鐘下降1℃的慢速凍結(jié)至-30℃。然后迅速放入液氮保藏器內(nèi)的-150℃氣相中，最后浸入到-196℃液氮中。
2.4攻擊菌的檢定
2.4.1攻擊菌復(fù)蘇 將凍存管從液氮罐中取出立即放入38～40℃的水浴中進(jìn)行急劇解凍，直到全部融化為止。
2.4.2攻擊菌稀釋 打開凍存管，將攻擊菌用生理氯化鈉溶液稀釋成每稀釋度含80000、8000、800、80和8個(gè)菌。
2.4.3攻擊途徑及劑量 每稀釋度（0.03ml）腦腔攻擊10只小鼠，每稀釋度分別攻擊80000個(gè)菌、8000個(gè)菌、800個(gè)菌、80個(gè)菌、8個(gè)菌。自增壓液氮罐
