從液氮罐中取出冷凍的細(xì)胞，是細(xì)胞培養(yǎng)和生物樣本庫(kù)管理中的一項(xiàng)關(guān)鍵操作。這個(gè)過(guò)程看似簡(jiǎn)單，但其中蘊(yùn)含著巨大的風(fēng)險(xiǎn)：既關(guān)乎操作者的人身安全（凍傷、窒息），也關(guān)系到珍貴細(xì)胞樣本的存亡（交叉污染、活性降低）。遵循標(biāo)準(zhǔn)流程是確保人與樣本安全的前提。

一、操作前的核心準(zhǔn)備

1. 個(gè)人安全防護(hù)：
這是不可妥協(xié)的第一步。液氮的溫度低至-196℃，接觸皮膚會(huì)造成嚴(yán)重凍傷。

• 防凍手套：必須佩戴寬松、保暖的專用低溫手套，切勿使用濕手套。

• 護(hù)目鏡：全程佩戴，防止液氮飛濺入眼。

• 實(shí)驗(yàn)服：穿好長(zhǎng)袖實(shí)驗(yàn)服和封閉的鞋子，避免皮膚暴露。

• 長(zhǎng)褲：確保穿著長(zhǎng)褲，保護(hù)腿部。

2. 環(huán)境與設(shè)備準(zhǔn)備：

• 通風(fēng)良好：確保操作區(qū)域空氣流通，避免液氮揮發(fā)導(dǎo)致局部空間氧氣含量過(guò)低，引起窒息風(fēng)險(xiǎn)。

• 檢查裝備：

• 長(zhǎng)柄鑷子：用于夾取細(xì)小的凍存管。

• 提籃手柄：確保與罐內(nèi)提籃的連接處完好。

• 專用轉(zhuǎn)移容器：準(zhǔn)備好一個(gè)足夠深的杜瓦罐或小型液氮罐，用于臨時(shí)放置取出的提籃和樣本，防止樣本在空氣中升溫。

• 規(guī)劃與識(shí)別：提前確認(rèn)好目標(biāo)細(xì)胞樣本在液氮罐中的具體位置（例如，第X號(hào)提籃，第Y行第Z列），做到“快、準(zhǔn)、穩(wěn)”，盡量減少罐口的開(kāi)啟時(shí)間。

二、取出流程：規(guī)范操作是關(guān)鍵

1. 開(kāi)啟罐蓋：

• 平穩(wěn)地移除液氮罐的頸塞和蓋蓋。動(dòng)作輕柔，避免大幅度攪動(dòng)。

2. 提取提籃：

• 將提籃手柄牢固地連接到目標(biāo)提籃的掛鉤上。

• 平穩(wěn)而迅速地將提籃從液氮中提升至罐口附近。此時(shí)，整個(gè)提籃和樣本都處于超低溫狀態(tài)，會(huì)劇烈地沸騰和噴濺液氮，屬正常現(xiàn)象，保持冷靜。

• 切勿將提籃完全提出罐口，應(yīng)使其大部分體積仍處于罐頸的冷氣區(qū)中。

3. 定位并夾取目標(biāo)凍存管：

• 在罐口冷氣區(qū)內(nèi)，快速用長(zhǎng)柄鑷子在提籃中尋找目標(biāo)凍存管。

• 夾取時(shí)，最好夾住凍存管的蓋子上部，避免夾管身，以防損壞或?qū)е鹿苌w意外開(kāi)啟。

• 夾取動(dòng)作要穩(wěn)，防止碰到其他樣本，造成交叉污染或標(biāo)識(shí)脫落。

4. 快速轉(zhuǎn)移與復(fù)查：

• 一旦夾住目標(biāo)凍存管，立即將其轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的、預(yù)冷過(guò)的專用轉(zhuǎn)移容器（杜瓦罐） 中。這個(gè)過(guò)程在空氣中的暴露時(shí)間應(yīng)控制在幾秒鐘之內(nèi)。

• 如果需要取出多個(gè)樣本，建議分批操作，每次只取一個(gè)，并立即放回轉(zhuǎn)移容器，不要將所有樣本都長(zhǎng)時(shí)間暴露在空氣中。

• 取出所有目標(biāo)樣本后，迅速、平穩(wěn)地將提籃放回液氮罐中原有的位置。

• 立即蓋好罐蓋和頸塞，恢復(fù)液氮罐的密封保溫狀態(tài)。

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三、核心安全原則與常見(jiàn)誤區(qū)

1. 安全原則：

• “三防”原則：

• 防凍傷：任何時(shí)候身體都不要接觸液氮、凍存管金屬部分或提籃。

• 防爆炸：這是最重要的一點(diǎn)！如果凍存管在液氮中浸泡時(shí)密封不嚴(yán)，液氮可能滲入管內(nèi)。取出后，管內(nèi)液氮受熱急劇氣化，體積膨脹約680倍，會(huì)產(chǎn)生巨大壓力，可能導(dǎo)致凍存管爆炸（噴出管蓋或管體破裂）。因此，操作時(shí)務(wù)必佩戴好護(hù)目鏡和面罩，并將凍存管始終置于防護(hù)蓋后面。

• 防窒息：保證通風(fēng)。

• 速度原則：整個(gè)操作過(guò)程要“穩(wěn)中求快”，最大限度地減少樣本在室溫下的暴露時(shí)間。溫度的劇烈波動(dòng)會(huì)嚴(yán)重?fù)p害細(xì)胞活性。

2. 常見(jiàn)誤區(qū)與禁忌：

• 禁忌：直接用手取管。皮膚會(huì)瞬間粘在超低溫的金屬或塑料上，造成撕裂性凍傷。

• 禁忌：將取出的樣本長(zhǎng)時(shí)間放在桌面上。細(xì)胞凍存液中的DMSO在較高溫度下對(duì)細(xì)胞有毒性，緩慢升溫會(huì)顯著降低細(xì)胞復(fù)蘇的存活率。

• 禁忌：在液氮罐正上方操作。防止液氮滴落或凍存管爆炸時(shí)傷及面部。

• 禁忌：讓提籃完全離開(kāi)罐口長(zhǎng)時(shí)間尋找樣本。這會(huì)導(dǎo)致提籃內(nèi)所有樣本升溫，影響其他細(xì)胞的保存質(zhì)量。

四、取出的后續(xù)步驟：細(xì)胞復(fù)蘇

取出凍存管僅僅是第一步，接下來(lái)需要進(jìn)行規(guī)范的細(xì)胞復(fù)蘇：

1. 從轉(zhuǎn)移容器中取出目標(biāo)凍存管，立即放入37℃的恒溫水浴鍋中，并不斷搖晃，使其在1-2分鐘內(nèi)完全解凍。

2. 解凍后，用酒精徹底消毒凍存管外壁。

3. 將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至含有預(yù)溫培養(yǎng)基的培養(yǎng)器皿中，進(jìn)行后續(xù)培養(yǎng)。

總結(jié)
從液氮罐中取出細(xì)胞是一項(xiàng)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)募夹g(shù)工作。成功的標(biāo)準(zhǔn)不僅是拿到了樣本，更是確保了操作者的絕對(duì)安全，并最大限度地保持了細(xì)胞的高活性和無(wú)污染狀態(tài)。牢記防護(hù)、迅速、規(guī)范三大要點(diǎn)，是順利完成這項(xiàng)工作的根本保障。